Microbiología
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Item Item Evaluación de la doxiciclina un derivado de tetraciclina, el cloruro de zinc, y el clodronato como inhibidores de efectos locales causados por el veneno de la serpiente "terciopelo" Bothrops asper(2009) García Quesada, Jonielle; Rucavado Romero, AlexandraLos miembros de la familia Viperidae producen venenos y son capaces de inyectar estas secreciones en humanos, generando cuadros clínicos de envenenamiento que se caracterizan por una fisiopatología compleja. En Centroamérica y en la parte norte de Sudamérica la especie Bothrops asper es la responsable de la mayoría de casos. Se ha mencionado la baja efectividad de algunos antivenenos para neutralizar los efectos locales del envenenamiento dado que las toxinas pueden causar necrosis irreversible rápidamente. Dada la importancia clínica que tienen los efectos locales, tales como hemorragia y edema en la fisiopatología de la mordedura de serpientes, se evalúo en este trabajo la eficacia que tienen los inhibidores, doxiciclina, clodronato, y el cloruro de zinc, sobre estos efectos y así evaluar su posible uso como complemento del suero antiofídico en el tratamiento del paciente accidentado, al aplicarse de manera independiente luego de la exposición al veneno. Para el estudio de la inhibición de la hemorragia por parte de estos tres inhibidores se probaron distintas concentraciones de inhibidor sobre la actividad hemorrágica de 15 ¿g/100¿I de veneno de B. asper, con inyección independiente en piel via i. d. obteniéndose, para la doxiciclina, en la máxima concentración de 100 mM un porcentaje de reducción de 81%, para el cloruro de zinc, la inhibición fue significativa en dos concentraciones y para el clodronato, fue posible observar inhibición significativa en todas las concentraciones ensayadas. Se ensayó además la inhibición de la hemorragia en músculo con una concentración de veneno de S0¿g/50¿1. Para este método se obtuvieron porcentajes de reducción para el inhibidor doxiciclina de 35% y 44%. Para los otros dos inhibidores se alcanza una reducción significativa a concentraciones muy altas, las cuales ya se asocian a toxicidad. Además de los ensayos realizados...Item Evaluación de la actividad proteolítica de metaloproteinasas de venenos de serpiente in vitro e in vivo utilizando sustratos de matriz extracelular fluorescentes(2015) Feoli Grant, Andrés,; Escalante Muñoz, TeresaLos eventos hemorrágicos generados por venenos de serpientes son causados principalmente por metaloproteinasas del veneno de serpiente o MPVS que se agrupan con base en la composición de sus dominios en PI, PII y PIII. Se ha llegado a la conclusión que un elemento clave para que las MPVS puedan dañar la microvasculatura y producir hemorragia in vivo, es la capacidad de estas metaloproteasas de alcanzar y degradar proteinas de la membrana basal de los capilares así como componentes de la matriz extracelular circundante. La mayoría de metaloproteinasas pueden degradar proteínas de matriz extracelular, sin embargo, existen diferencias en la actividad hemorrágica de estas enzimas y aún no se conoce la causa de estas diferencias. Una hipótesis es que las enzimas con mayor potencia hemorrágica poseen mayor capacidad proteolítica sobre proteínas claves de la membrana basal como el colágeno tipo IV. Para evaluar esta hipótesis en esta investigación se evaluó la actividad proteolítica de metaloproteinasas de los grupos PI, PII y PIII con distinta potencia hemorrágica, utilizando gelatina y colágeno tipo IV fluorescentes. Con estos ensayos se logró demostrar que la actividad proteolítica sobre gelatina varía según la metaloproteinasa estudiada, siendo mayor en la PIII, seguida por la PII y por último la PI, En el caso del colágeno IV, las tres metaloproteinasas fueron capaces de degradarlo, sin embargo, la PI (metaloproteasa con menor potencia hemorrágica fue la que degradó en mayor grado este sustrato, lo que sugiere que la actividad proteolítica in vitro no correlacionan con la actividad hemorrágica de estas toxinas y que juegan un papel importante otros factores como fuerzas biofísicas, flujo, distribución de las toxinas y accesibilidad al sustrato. Por otra parte, otra interrogante aún no estudiada, es por cuánto tiempo se mantienen activas las metaloproteinasas en los...Item Capacidad neutralizante del suero antiofídico polivalente sobre la actividad proteolítica del veneno de la serpiente Bothrops asper y su posible correlación con la neutralización de la letalidad(2006) Rojas Vargas, José Andrés; Escalante Muñoz, TeresaCon el presente estudio se evaluó la capacidad neutralizante del suero antiofídico polivalente sobre la actividad proteolítica del veneno total de la serpiente Bothrops asper y de una fracción de alta masa molecular, en la que predominen las toxinas hemorrágicas, obtenida del mismo veneno y determinar su correlación con la neutralización de la letalidad. Se utilizó veneno total obtenido de un pool de especimenes adultos de Bothrops asper de las zonas Atlántica y Pacífica de Costa Rica; y lotes de suero antiofídico polivalente producido en el Instituto Clodomiro Picado. La fracción de alta masa molecular del veneno de Bothrops asper fue separada mediante cromatografía de filtración en gel utilizando una columna Sephacryl S-200 y se evaluó la fracción obtenida mediante la determinación de la Dosis Hemorrágica Mínima y una electroforesis SDS-PAGE. Para evaluar la actividad del veneno y la fracción; así como la capacidad neutralizante de los sueros antiofídicos se emplearon ensayos de actividad proteolítica con caseína biotinilada y azocaseína como sustrato de acción. Además se pretendió con este estudio establecer una correlación entre los datos de neutralización de la actividad proteolítica y los datos de neutralización de la letalidad de los diferentes lotes de suero antiofídico utilizados en este estudio. Los resultados obtenidos demuestran que se necesitó un mayor volumen de suero antiofídico para neutralizar la fracción de alta masa molecular que el veneno total y que no se obtuvo una correlación entre la neutralización de la actividad proteolítica y la neutralización de la letalidad. Se puede concluir que la prueba de actividad proteolítica sobre azocaseína, es una metodología in vitro idónea para evaluar la neutralización de la actividad hemorrágica.