Ciencias Básicas
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Item Clonación del genoma completo del virus del moteado amarillo leve del ayote (SYMMoV) e inoculación por métodos biobalísticos(2006) Quirós Álvarez, Marianela; Karkashian Córdoba, James PatrickEl virus del mosaico amarillo leve ·del ayote (SYfvfMoV), es un miembro de los Begomovirus (Geminiviridae), caracterizados por poseer partículas isométricas gemelas, un genoma circular de ADN en simple banda, infectar dicotiledóneas y ser transmitidos por la mosca blanca, Bemisia tabad. En Costa Rica, SYMMoV se ha encontrado asociado a enfermedades en cucurbitáceas, papaya y frijol, con una amplia distribución. Los síntomas asociados a la presencia del patógeno son un leve moteado amarillo y arrugamiento foliar. En este trabajo se u tilizaron muestras de ayote (Cucurbita moschata) recolectadas en San Jerónimo de Naranjo, que presentan la sintomatologia característica de la infección viral Con base en las secuencias virales disponibles (No. accesión GenBank AY064391, AF440790) se diseñaron oligonucleótidos traslapantes específicos para SYMMoV, escogiendo un sitio de restricción úruco en cada componente genómico. Se amplificaron los componentes genómicos completos por medio de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los productos purificados de la reacción fueron insertados en el vector de donaje pTZS7R/T (Fermentas, Ontario, Canadá) y los plásmidos recombinantes fueron transformados en Escherichia coli XL1-Blue. La presencia del inserto en los dones obtenidos se determinó por digestión con enzimas de restricción. Se secilenció un segmento del componente A clonado usando los iniciadores M13-F-20 y M13-R-27. Se realizaron inoculaciones a plantas sanas de frijol por bombardeo de micropartículas de oro recubiertas del ADN viral previamente digerido en el sitio de clonaje. Las condiciones óptimas para el bombardeo fueron 25 mmHg a 1550psi de presión de rompimiento del disco de la ruptura, y a una distancia de 9cm de la malla de retención a las radículas que fueron bombardeadas con microacarreadores de oro recubiertos con Sug de ADN de cada componente viral. Como con...Item Análisis de secuencias polimórficas del núcleo y cloroplasto por conformación de ADN simple banda en introducciones de Cucurbita moschata Duchesne procedente de Mesoamérica(2007) Barboza Vargas, Natalia María; Ramírez Fonseca, PilarThe aim of this investigation was the genetic characterization of 218 accessions of Cucurbita moschata Duchesne a squash, with sorne morphologic characteristics that make it of agronomic interest, which are part of the germoplasm bank of the CATIE . The accessions carne from Mexico and Central America; also, we have a genotype from Curacao, Colombia, Peru and tbe Rusian Federatíon. Polymerase chain reaction (PCR) and single strand conformation polymorphism analysis (SSCP,) were used for the analysis of the regions amplified with ITSl-ITS2 nuclear primers and tmL-trnF chloroplast primers. Haplotypes were constructed according to band pattem and SSCP gels. 25 and 24 haplotypes were found, using ITSI-ITS2 and tmL-tmF markers, respectively. We found unique haplotypes with botb markers, like the 20 and 21 from Mexico, 14 and 24 from Guatemala, six from Honduras, 13 and 16 from Nicaragua, and 17 and 25 from Costa Rica with the ITSI-ITS2 SSCP gels. While with the tmL-tmF were the haplotype seven from Colombia, eight from Guatemala. nine from Honduras, 10 from Nicaragua, 12, 13 and 17 from Mexico, 21, 22 and 23 from Costa Rica and 24 from El Salvador. This information can be used to identify others accessions of agreement to them place of origin. We selected and sequenced two inclivíduals of each haplotype with the trnL-trnF marker. We established tbat the six haplotype obtained from the chloroplast sequences were common among the nine accessions of popuJations from Costa Rica, Mexico, Guatemala, Nicaragua, and Honduras. We could determínate the genetic variation among the accessíon of squasb from Mesoamerica using the ITSI-ITS2 nuclear primers and tmL-tmF chloroplast primers.